Hibridizarea fluorescenta in situ (FISH) este o tehnică de citogenetică moleculară utilizată în scopul identificării anomaliilor cromozomiale, numerice şi structurale (care nu pot fi detectate prin cariotipare).
Principiul acestei metode constă în ataşarea la secvenţa-ţintă a unei sonde de ADN monocatenar (de circa 40 kb), marcată fluorescent, pe baza complementarităţii, de o secvenţă-ţintă a unui cromozom. Hibridizarea sondei cu ADN-ul celular este vizualizată la microscopul cu fluorescenţă echipat cu filtre de excitaţie şi emisie, ceea ce permite citirea semnalelor specifice zonei-ţintă. Se numără şi se analizează semnalele prezente în o sută de celule (de ex., trei semnale fluorescente specifice pentru cromozomul 21 indică sindromul Down).
Tehnica FISH permite detectarea mozaicismelor, identificarea rearanjărilor cromozomiale complexe.
Mai multe sindroame dismorfice (sindromul Williams, Prader Willi, Angelman, Di George) produse de microdeleţii sau microduplicaţii, suspectate clinic, imposibil de observat prin tehnicile citogenetice convenţionale, pot fi evidenţiate prin FISH metafazic. Întrucât această metodă presupune ca primă etapă de lucru obţinerea unor culturi celulare (limfocite din sânge periferic sau amniocite recoltate prin amniocenteză în săptămânile 15-17 de sarcină), rezultatul investigaţiei este obţinut în două săptămâni.
FISH-ul interfazic permite punerea în evidenţă a anomaliilor numerice, detecţia sexului genetic într-un timp scurt (48-72 h). Se realizează pe nuclei interfazici fără să fie nevoie de efectuarea de culturi celulare. Se folosesc sonde de ADN corespunzătoare regiunilor centromerice ale cromozomilor 18, X, Y (CEP18, CEPX, CEPY), respectiv sonde locus specifice pentru cromozomii 13 şi 21 (LSI13, LSI21). Metoda este mai puţin informativă în cazul contaminării cu celule materne (comparativ cu alte tehnici).
Analiza FISH este o metodă specifică, performantă, dar laborioasă, care necesită celule intacte; nu se substituie celorlalte metode de analiză cromozomială şi are indicaţii foarte precise. FISH-ul interfazic este indicat a fi folosit ca test de screening rapid atunci când există semne de alertă ecografică sau biochimică (dublu test, triplu test), iar ulterior se recomandă o evaluare citogenetică completă.
FISH interfazic – prezenta a trei semnale rosiiroşii indica trisomia 21 (Down)
FISH metafazic – Prader Willi del (15) (q11-q13)
